Хемијска лигација
Хемијска лигација је сет техника које се користе за стварање дугачких пептидних или протеинских ланаца. То је други степен у конвергентном приступу. Прво се мањи пептиди са 30-50 аминокиселина припреме конвенционалном хемијском синтезом пептида[1]. Они су потпуно незаштићени. Хемијска лигација је техника повезивања тих пептида путем хемоселективних реакција да би се добио јединствен производ, обично у воденом раствору. Са неколико узастопних повезивања, протеини до 200-300 аминокиселина се могу произвести.
Методи хемијске лигације[уреди | уреди извор]
Више техника је описано у литератури.[2] Најпрактичнији и најробустнији метод за хемоселективне реакције незаштићених пептида је природна хемијска лигација.[3][4] Природна хемијска лигација је превазишла лимитације класичног синтетичког органско хемијског приступа тоталној синтези протеина, и омогућава рутинску тоталну или семи- синтезу протеинских молекула. Оригинални хемијско лигациони методи су формирали нон-нативне везе на месту лигације.[5] Нативна хемијска лигација је била накнадно развијена. У нативној хемијској лигацији, незаштићени пептид-тиоестар реагује са Cys-пептидом да произведе лигациони производ са природном пептидном везом на месту лигације. У том методу, иницијални тиоестар-везани лигациони интермедијар се реорганизује да формира амидну везу.
Нативна хемијска лигација ослања на присуство остатака цистеина на месту лигације. Методи који користе заштитне помоћне групе могу у неким случајевима да прошире опсег употребе нативне хемијске лигације на нон-цистеинске остатке, као што може и употреба десулфуризације након лигације (нпр. конвертовање Цyс у Ала).
Изражена протеинска лигација[уреди | уреди извор]
Коришћењем природног интеина могуће је припремити рекомбинантни полипептид C-терминални тиоестар. Ово омогућава употребу великих рекомбинантних протеина – изведених из тиоестера у нативној хемијској лигацији.[6] Рекомбинантни тиоестар може бити спојен у а синтетички пептид са N-терминалним цистеином. Нативна хемијска лигација ове врсте користећи рекомбинантне C-терминалне тиоестере је позната као изражена протеинска лигација. Рекомбинантна експресија такође бити коришћена да произведе Cys-полипептид за употребу у нативној хемијској лигацији.
Литература[уреди | уреди извор]
- ^ Кент СБ (2009). „Тотал цхемицал сyнтхесис оф протеинс”. Цхем.Соц.Рев. 38: 338—351. дои:10.1039/б700141ј.
- ^ Сцхнöлзер M, Кент СБ (1992). „Цонструцтинг протеинс бy доветаилинг унпротецтед сyнтхетиц пептидес: бацкбоне-енгинееред ХИВ протеасе”. Сциенце. 256: 221—5.
- ^ Нилссон БЛ, Соеллнер МБ, Раинес РТ (2005). „Цхемицал Сyнтхесис оф Протеинс”. Анну. Рев. Биопхyс. Биомол. Струцт. 34: 91—118.
- ^ Банг D, Пентелуте БЛ, Кент СБ (2006). „Кинетицаллy цонтроллед лигатион фор тхе цонвергент цхемицал сyнтхесис оф протеинс”. Ангеw Цхем Инт Ед Енгл. 45: 3985—8.
- ^ Даwсон ПЕ, Муир ТW, Цларк-Леwис I, Кент СБ (1994). „Сyнтхесис оф протеинс бy нативе цхемицал лигатион”. Сциенце. 266: 776—9.
- ^ Муир ТW. (2003). „Семисyнтхесис оф протеинс бy еxпрессед протеин лигатион”. Анну Рев Биоцхем. 72: 249—89.